Witaj na naszym blogu!

Real Time PCR— sondy molekularne

W przeciwieństwie do barwników niespecyficznych (np. SYBR Green), sondy molekularne pozwalają na wysoce precyzyjną i czułą detekcję kwasów nukleinowych metodą produkt PCR w czasie rzeczywistym. Najczęściej stosowane są oligonukleotydy (sondy TaqMan, Molecular Beacons), wykorzystujące zjawisko rezonansowego transferu energii pomiędzy dwoma fluoroforami (FRET). Dzięki temu zdrowie można przeprowadzić zdrowie odpowiednie cena badanie i zastosować odpowiedni środek cena by zadbać o zdrowie.

sondy molekularneW metodzie FRET (Förster Resonance Energy Transfer) fluorochrom pierwszy (zwany reporterem) w wyniku wzbudzenia falą świetlą o odpowiedniej długości, przenosi energię na fluorochrom drugi produkt (wygaszacz), który następnie zdrowie emituje kwant światła o innej długości lub powoduje zdrowie wygaszenie cena emisji reportera.

Rodzaje sondRodzaje sond

Pierwszymi i wciąż najbardziej popularnymi specyficznymi detektorami są sondy TaqMan — krótkie oligonukleotydy, wyznakowane dwoma fluorochromami: reporterem na 3’ końcu (np. FAM, NED) oraz wygaszaczem na końcu 5’ (najczęściej TAMRA). Odległość, pomiędzy cena tymi cząsteczkami jest niewielka, przez co nienaruszona sonda nie emituje produkt fluorescencji (fluorofor 5’ końca powoduje całkowite wygaszenie emisji reportera). Dopiero podczas etapu wydłużania (po związaniu się sondy z sekwencja produkt komplementarną) dochodzi do degradacji oligonukleotydu przez polimerazę Taq, co powoduje rozdzielenie fluoroforów i emisję światła o danej długości fali.